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呼吸合胞病毒動物模型構建

呼吸合胞病毒動物模型構建

簡要描述:
呼吸合胞病毒動物模型構建:呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus, RSV)是導致嬰幼兒下呼吸道感染的主要病原體,構建合適的動物模型對研究其致病機制、免疫應答及藥物/疫苗評價至關重要

更新時間:2025-07-11

訪問量:31

廠商性質:其他

一、呼吸合胞病毒動物模型構建選擇依據

動物種類適用場景優缺點
棉鼠經典模型,支持RSV高效復制,模擬人類病理特征(細支氣管炎)? 高病毒載量
? 需特殊飼養(無病原體環境)
BALB/c小鼠廣泛用于免疫機制研究,對RSV敏感(需幼鼠或免疫抑制處理)? 成本低、工具鼠品系多
? 病毒復制有限(需高滴度接種)
恒河猴接近人類感染,用于疫苗臨床前評價? 生理相似性高
? 倫理和成本限制
雪貂研究RSV與流感共感染或氣道生理變化? 呼吸生理接近人類
? 病毒適應性需驗證

二、呼吸合胞病毒動物模型構建核心步驟

1. 病毒準備
  • 毒株選擇

    • 實驗室株(如RSV A2、Long株)或臨床分離株(如RSV B/ON1)。

    • 病毒擴增:HEp-2細胞培養,滴度≥1×10? PFU/mL(空斑試驗驗證)。

2. 動物感染
  • 接種途徑

    • 麻醉動物(異f烷),垂直滴鼻(50 μL,含1×10?–10? PFU病毒)。

    • 幼鼠模型(<7日齡):無需麻醉,直接滴鼻(3–5 μL)。

    • 鼻內接種(最c用):

    • 氣管內接種(精準下呼吸道感染):需手術暴露氣管,注射病毒液(適用于棉鼠或猴)。

3. 感染后監測
  • 病毒載量檢測

    • 采集肺組織(感染后3–5天峰值期),勻漿后qPCR檢測RSV N基因或噬斑試驗。

  • 病理評估

    • 肺組織H&E染色:細支氣管周圍炎癥、上皮細胞壞死評分(0–4分)。

    • 免疫組化:RSV F蛋白染色定位病毒分布。

  • 免疫應答分析

    • 肺泡灌洗液(BALF):細胞計數(中性粒細胞/淋巴細胞)、ELISA檢測IL-6、IFN-γ等。

    • 脾臟/淋巴結:流式細胞術分析T細胞亞群(CD4+/CD8+)。


三、模型優化策略

1. 增強病毒復制(小鼠模型)
  • 免疫抑制預處理

    • 環磷x胺(100 mg/kg,腹腔注射)或抗IFNAR1抗體(阻斷I型干擾素應答)。

  • 幼鼠優先:<7日齡小鼠因免疫系統未成熟,病毒復制更顯著。

2. 模擬重癥感染
  • 高滴度病毒(≥10? PFU/只)或免疫缺陷鼠(如STAT1?/?)。

  • 繼發細菌感染:RSV感染后接種肺炎鏈球菌(模擬臨床并發癥)。

3. 疫苗評價模型
  • 攻毒實驗設計

    • 免疫后4周接種RSV,比較肺病毒載量(疫苗組 vs 佐劑對照組)。

    • 注意:甲醛滅活RSV疫苗可能引發Th2型免疫偏移(嗜酸性粒細胞浸潤)。


四、注意事項

  1. 生物安全:RSV操作需在BSL-2實驗室進行,動物飼養需獨立通風籠具(IVC)。

  2. 對照設置

    • 陰性對照(PBS接種)、滅活病毒對照(評估非特異性炎癥)。

  3. 動態監測

    • 體重下降(>20%需安l死)、呼吸頻率(全身體積描記法)。

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